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发布时间:2018-09-22 来源:香港最准一肖一码2018

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贴壁细胞处理方法

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二、 镜下观察:

未超过80%汇合度时,将瓶装的完全培养液移入无菌瓶中,留待日后培养用,原瓶(T25瓶)保留6-8ml完全培养液,放入37℃、5%CO2孵箱培养

超过80%汇合度时,按要求比例消化传代

三、消化方法

1、将瓶装的完全培养液移入无菌瓶中,留待日后培养用。加消化液0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red消化。

2、T25瓶加3ml PBS,洗一次,弃上清,再加1ml消化液消化,显微镜下观察,等细胞完全脱离瓶壁分离成单个后,加培养基混匀,离心收集,按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6, 1:6-1:8),每T25瓶加培养基至6-8ml,37℃、5%CO2孵箱培养

四、若客户收到2ml小管细胞

收到细胞以后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超菌台内,严格无菌操作;然后将小管细胞转移至T25培养瓶,加入9ml左右含FBS的培养基混匀,放入培养箱过培养后查看细胞汇合度:若未超过80%汇合度,换液继续培养,据情况传代或者冻存。若超过80%汇合度,可直接进行传代(方法同上)

    该细胞使用培养基:1、DMEM(高糖)    2、R1640    3、R1640(改良)4、MEM(EBSS)    5、MEM(NEAA)    6、D/F12    7、F12    8、F12K    9、MaCcoy‘5A    10、L15    

血清要求:1、20%FBS    2、15%FBS    3、10%FBS    4、5%FBS    5、2.5%FBS    6、15%HS    7、10%HS    8、5%HS    9、2.5%HS    10、10%CCF(灭活)

四、细胞代数:      复苏人:     

冻存液:常规培养液+20%FBS+8%DMSO

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